MG 63ヒト骨肉腫細胞

一、細胞基本属性

細胞別称：M-G63; MG63；ヒト骨肉腫

種属源：人

年齢性別：男、14歳

組織由来：骨、骨肉腫

成長特性：壁貼り成長

細胞形態：線維芽細胞様

背景の概要：MG-63細胞は14歳の骨肉腫を患う白人男性に由来し、MG−63細胞に高レベルのインターフェロン産生を誘導することができる。MG−63細胞はTGF−β受容体IとIIを発現する。

生物安全等級：1

細胞規格：1×106 cells/T 25培養瓶または1 mL凍結保存管包装

マイコプラズマ検出：なし

遺伝子発現状況：インターフェロン

保管機構：ATCC; CRL-1427 ECACC; 86051601；中国医学基礎医学研究所細胞資源センター

培地：90%のMEM+10%のFBS

培養条件：気相：95%空気+5%二酸化炭素、温度：37℃

凍結保存条件：無血清凍結保存液、液体窒素貯蔵

乗算時間：〜28-38時間

STR鉴定位点アメロゲニン：X、YCSF1PO：10、12D13S317：11D16S539：11、12D18S51：12、16D19S433：13、14D21S11：30D2S1338：17、24。D3S1358：15、20D5S818：11、12D7S820：10、11.1D8S1179：13FGA：21、25TH01：9.3。TPOX：8、11vWA：16、19

二、細胞培養操作

1）蘇生細胞：以下の細胞培養凍結保存処理は参考に供し、具体的な操作手順は商品取扱説明書を主とする

を含む1 mL細胞懸濁液の凍結保存管を37℃水浴中で急速に揺動解凍し、4 mL培地を加えて均一に混合した。1000 rpm条件下で3分間遠心分離し、上澄み液を捨て、培地を1〜2 mL加えた後、均等に吹き付けた。その後、すべての細胞懸濁液を適量の培地を含むフラスコに加えて一晩培養する（または細胞懸濁液を6 cm皿に加え、約4 mLの培地を加え、一晩培養する）。3日目に液を交換し、細胞密度を検査した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

a、細胞が培養瓶の80%面積を覆うまで成長した場合、25 cm 2培養瓶の培養液を捨て、PBSで細胞を1回洗浄する。

b、0.25%消化液約1 mlを培養瓶に添加し、逆さま顕微鏡下で観察し、細胞が収縮して丸くなったら培養液を添加して消化を中止し、細胞を軽く吹きつけて脱落させ、その後懸濁液を15 ml遠心管に移し、1000 rpm遠心5 min ;

c、上清を捨て、沈殿細胞を12 mlの培地で再懸濁し、その後1：2の割合でフラスコ継代を行い、最後に37℃、5%CO 2細胞培養箱に入れて培養した、

d、細胞を壁に貼り付けた後、培養結果を観察し、その後、液交換培養または継代を行った。

3）細胞凍結保存：細胞成長状態が良好な場合、細胞凍結保存を行うことができる。次のT 25本を例に挙げます。

a、細胞が培養瓶の80%面積を覆うまで成長した場合、25 cm 2培養瓶の培養液を捨て、PBSで細胞を1回洗浄する。

b、0.25%消化液約1 mlを培養瓶に添加し、逆さま顕微鏡下で観察し、細胞が収縮して丸くなったら培養液を添加して消化を中止し、細胞を軽く吹きつけて脱落させ、その後懸濁液を15 ml遠心管に移し、1000 rpm遠心5 min ;

c、適量の凍結保存液（FBS：DMSO＝9：1）を用いて細胞を再懸濁し、凍結保存管中に放置する。

d、まず細胞凍結保存管を−20℃1.5 hに置き、それを−80℃に一晩移し、24 h後に液体窒素に移して長期保存した。プログラム冷却ボックスを使用して、-80℃に直接入れることができます。

三、育成注意事項

1.細胞を受け取った後、まず細胞瓶が完全かどうか、培養液の液漏れ、濁りなどの現象があるかどうかを観察し、もし上記の現象が発生したら、直ちに私たちに連絡してください。

2.細胞説明書をよく読み、細胞の形態、使用する培地、血清の割合、必要なサイトカインなどの細胞関連情報を理解し、細胞培養条件の一致を確保し、培養条件の不一致によって細胞に問題が発生した場合、責任は顧客自身が負う。

3.75%アルコールで細胞瓶表面を拭き、顕微鏡下で細胞状態を観察する。輸送の問題で、一部の細胞は温度変化と激しい接触破砕によって破片を形成し、正常な現象である。細胞状態を観察した後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を37℃培養箱に2〜4時間置いた。

4.壁貼り細胞は消化でき、懸濁細胞は直接混合して細胞を収集し、900 rpm-1000 rpmは3分間遠心分離し、上清を捨てる。PBS再懸濁細胞5 mLを加え、さらに900 rpm−1000 rpmで3分間遠心分離し、新鮮な培地で細胞を再懸濁し、新しい培養瓶または培養皿に接種し、培養箱に入れて培養した。

5.顧客に細胞培養のために同じ条件の培地を使用してもらう。

6.お客様は細胞を受け取ってから3日前にそれぞれ何枚かの細胞写真を撮り、細胞状態を記録し、弊社技術部とのコミュニケーションを容易にすることを提案する。輸送の原因で、個別の敏感細胞に不安定な状況が発生することがあります。直ちに私たちに連絡して、細胞の具体的な状況を知らせて、私たちの技術者が問題が解決するまで訪問を追跡するために。

7.この細胞は科学研究用にのみ使用される。

8.備考：輸送用の培地（灌液培地）は細胞の培養には使用できません。説明書の細胞培養条件に従って新たに調製した培地と交換して細胞を培養してください。細胞後次継代提案を受けた1：2継代。

9.注意：1：2継代は1つのT 25瓶を2つのT 25瓶または2つの6 cm皿に渡すことである。1つのT 25瓶に2つの10 cm皿を渡すのではありません。

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