OAR-L 1細胞専用培地

商品の説明：

OAR-L 1細胞専用培地製品紹介

OAR-L 1細胞専用培地はチームが入念に最適化し、長期テストを経て、本製品はOAR-L 1細胞の成長状態を維持することができる。

この製品にはすでに含まれていますOAR−L 1細胞の成長に必要な各種成分は、いかなる成分も添加する必要はなく、OAR−L 1細胞の培養に直接使用することができる。

製品の主要成分

DMEMベース培地445 ml

特級胎児牛血清 50ミリリットル

P/S青カビsu-ストレプトマイシン5 ml

輸送と保存

輸送：バイオ氷嚢を含む保温箱に入れて低温輸送

保存方法：2℃〜8℃、光を避け、2ヶ月保存する、-20℃、光を避け、6ヶ月保存します。

ひんしつせいぎょ

注意事項：

科学研究用に限る。

培養システムの一部の成分は人体の健康に有害な物質であり、暴露された皮膚で培養システムの液体と培養システムの液体が残っている容器の内部に接触しないでください。この部分の有害物質は濃度も危害性も低く、接触があればすぐに水道水で洗い流せばよい。

細胞培養手順：

一.培地及び培養凍結保存条件の準備：

1）DMEM-H培地（NaHCO 3 1.5 g/L添加）を準備し、90%、子牛血清、10%。293 T細胞を懸濁成長させるために、実験の必要に応じて懸濁培地を選択することもできる。

2）培養条件：気相：空気、95%、二酸化炭素、5%。温度：37℃、培養箱の湿度は70%〜80%である。

3）凍結保存液：90%培地、10%DMSO、現用現用配合。液体窒素貯蔵。

二.細胞処理：

1）蘇生細胞：1 mLの細胞懸濁液を含む凍結保存管を37℃の水浴中で急速に揺動解凍し、4 mL培地を加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で4分間遠心分離し、上澄み液を捨て、1-2 mL培地を補充した後、均等に吹き付けた。その後、すべての細胞懸濁液を一晩培養瓶に加えて培養した（または細胞懸濁液を10 cm皿に加え、約8 mlの培地を加え、一晩培養した）。翌日に液を交換し、細胞密度を検査した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

壁貼り細胞の場合、継代は以下の方法を参照することができる：

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.消化液2 ml（0.25%Trypsin-0.53 mM EDTA）を培養瓶に入れ、37℃培養箱に置いて1-2分間消化し、その後顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、もし細胞の大部分が丸くなって脱落したら、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、少量の培地を加えて消化を停止した。

3.6-8 ml/瓶で培地を補充し、軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で4分間遠心分離し、上澄み液を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。

4.細胞懸濁液を8 mlの培地を含む新しい皿または瓶に1：2〜1：5の割合で分けた。

3）細胞凍結保存：細胞成長状態が良好な場合、細胞凍結保存を行うことができる。壁貼り細胞を凍結保存する場合、培地を捨てて少量を加え、細胞が丸くなって脱落した後、血清を含む培地を約1 ml加えて凍結保存管に加え、さらに10%DMSOを添加して凍結保存を行った。

細胞を冷凍保存する方法？

冷凍保存方法1：冷凍管を4℃30 ~ 60分→（-20℃30分*）→-80℃16 ~ 18時間（または一晩おき）→液体窒素槽vaporphaseに長期保存する。

冷凍保存方法2：冷凍管を設定したプログラム可能な降温機に置き、毎分1〜3℃から–80℃以下に下げ、更に液体窒素槽vapor phaseに入れて長期保存する。-20℃は1時間を超えてはならず、氷結晶が大きすぎて細胞が大量に死ぬのを防ぐために、このステップをスキップして-80℃の冷蔵庫に直接入れることもできますが、生存率は少し低下します。

会社が販売している製品：

1）37℃の水浴釜で培地を予熱する、15 mLの無菌遠心管を用意し、8 mLの予熱培地を加えた。

2）凍結保存細胞を液体窒素タンクから取り出し、37℃の水浴鍋に急速に入れて復温する（清潔なビーカーを用意し、37℃の水を満たし、細胞凍結保存管を取り出した後、迅速にビーカー内に入れ、更に段階的に水浴鍋に移すことができる）。凍結貯蔵管を軽く揺動させ、細胞を1 ~ 2 min以内に解凍させ、損傷しやすい温度帯(-5 ~ 0℃)をできるだけ早く通過させることができるようにする。凍結貯留管の管口は水に入らないように注意し、汚染を避ける。

3）75%アルコールで凍結保存管を拭き取った後、超浄台内に置き、管内細胞を準備した遠心管内に移し、軽く液体を吹き付け、細胞を均一に分散させ、DMSO濃度を下げ、吹き付ける時に気泡の発生を避ける。新鮮な培地で管壁を2回洗浄し、いずれも遠心管内に移した。

4）800 rpmで5分間遠心分離し、上清を捨て、新鮮な培地を加え、細胞懸濁液を吹き付けた。

5）細胞懸濁液をT 25細胞瓶に移し、適量の培地を補充し、細胞瓶を軽く揺らして細胞分布を均一にし、温箱に入れて培養する。

6）翌日に細胞壁付着成長を観察し、新鮮な培地を交換して死細胞を除去した。培養を続け、細胞長が80〜90%になるまで合流すると正常に継代した。一般的に回復したばかりの細胞は2 ~ 3回の継代を経て、細胞の活力が回復してから後続の実験を行うことができる。