TRzol（総RNA抽出試薬）

TRzol（総RNA抽出試薬）

製品紹介：

TRzol試薬は細胞または組織から総RNAを直接抽出する試薬である。細胞を破砕し溶解する際にRNAの完全性を維持することができます。クロロホルムを添加して遠心分離し、サンプルを水サンプル層と有機層に分けた。RNAは水様層に存在する。上の水サンプル層を収集した後、RNAはイソプロパノール沈殿により回収することができる。

ヒト、動物、植物、細菌組織にかかわらず、この方法は少量及び大量の組織と細胞に対して比較的に良い分離効果がある。TRzol試薬の操作上の簡単さは、複数の試料を同時に処理することを可能にする。すべての操作は1時間以内に完了できます。TRzol抽出した総RNAはDNAと蛋白質の汚染を避けることができる。したがって、RNAインプリント分析、斑点ハイブリダイゼーション、poly（A）+選択、invitro転写、RNA酵素保護分析、分子クローニングを行うことができる。

TRzol試薬は異なる種類の異なる分子量サイズの複数のRNAの析出を促進することができる。例えば、ラット肝臓から抽出されたRNAはアガロースゲル電気泳動により電気泳動し、臭化エチル錠で染色され、7 kbと15 kbの間に不連続な高分子量ストリップ（mRNAとhnRNA成分）が多く、2つの優位性リボソーム~ 5 kb（28 S）と~ 2 kb（18 S）、低分子量RNAは0.1と0.3 kbの間（tRNA、5 S）を介在することが分かった。抽出されたRNAをTEで希釈すると、そのA 260／A 280比は≧1.8となる。

製品貯蔵：TRzolは室温で12ヶ月間安定して保存できる。それでも、良い効果を得るためには、2 ~ 8℃の環境下で保存することをお勧めします。（具体的な操作の詳細は説明書を参照）

一、テンプレートDNA：PCR反応にはテンプレートDNAが必要であり、例えば細胞、組織、血液からDNAを抽出するなど、

二、プライマー：PCR反応の2つのプライマーは、テンプレートDNAの両端とそれぞれ結合して増幅するために必要な特定の領域であり、プライマーはTAクローニングなどの過程で使用されたプライマーに合成することもできる、

三、dNTPs：PCR反応には4種類のdNTPsが必要で、デオキシアデノシン酸（dATP）、デオキシチジン酸（dCTP）、デオキシグアニル酸（dGTP）、デオキシシトシン酸（dTP）を含み、細胞分裂、DNA合成などの生物学過程に用いられ、PCR増幅のためのテンプレートDNA鎖の延長と増幅に用いられる、

四、Taq DNAポリメラーゼ：PCR反応に必要なポリメラーゼ、一般的にTaqポリメラーゼを使用し、PFU、Phusionなどの他の種類のポリメラーゼがあり、DNA鎖を増幅するために使用される、

五、PCR buffer溶液：PCR反応に対して緩衝作用があり、反応pHを調節し、チオ硫酸水素塩SDS、ホルムアルデヒドのような小分子有機化合物は、PCR反応の特異性を強化し、それによって反応効率を高めることができる、

六、酵素切断システム：PCR増幅はしばしば組み換え、構築、配列決定などの実験ステップに関連し、しばしば酵素切断操作を行う必要がある。

七、MARK：DNA断片の大きさを判別するための分子量基準。

八、DNA精製キット：PCR反応生成物を精製するため、

裸粥
Oligo dTを選択する場合、RNAにはPoly Aが必要なので、真核生物のmRNAはすべて適用されます。長鎖または全長mRNAに適したRTは、RNAサンプルの品質に高い要求があり、明らかなDNA汚染、RNA分解、RNA破壊がないようにしてください。新しいmRNAを探索してRT反応を行うには、Oligo dTプライマーを使用することをお勧めします。Oligo dTプライマーを使用することは、ランダムプライマーや特異的プライマーよりも安定性が高い。
②ランダムプライマー
様々なRNAに適したRTは、特にテンプレートの存在度が低い場合（例えば、あるgene発現量が低い場合）に適しています。ランダムプライマーを選択する場合、鎖cDNA合成反応ではすべてのRNAをテンプレートとし、その後PCR反応を行う際にプライマーを設計して特異的に増幅する。同時にランダムプライマーの量と総RNA量との関係に注意し、一般に総RNAの5µg当たりのランダムプライマーの使用量は50 ngであることを提案し、総RNAの5µg当たりのランダムプライマーの使用量が250 ngを超えると、小断片生成物（＜500 bp）の増加と長断片、全長生成物の低下を招く可能性がある。
③特異的プライマー
遺伝子特異性プライマー（GSP）はある遺伝子配列の一部であり、テンプレートと相補的なプライマーである。プライマーは、標的RNAの既知の配列と組み合わせて設計する必要がある。プライマーとRNA配列の特異的結合のため、各標的RNAは新しい遺伝子特異的プライマーセットを必要とする。したがって、複数のターゲットを分析する場合、より多くのRNAサンプルを適用する必要があります。また、プライマーによってアニール温度がそもそも異なるため、一般的には使用を推奨しない。特異的プライマーを使用する必要がある場合は、アニール温度を最適化することをお勧めします。