RK-13（ウサギ腎細胞系）

細胞処理：

1）凍結保存細胞の回復：

1 mLの細胞懸濁液を含む凍結貯蔵管を37℃の水浴中で急速に揺動解凍し、4-6 mLの培地を含む遠心管に加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で3〜5分間遠心分離し、上清を捨て、培地に細胞を再懸濁した。次いで、細胞懸濁液を6〜8 mlの培地を含む培養瓶（または皿）に加え、37℃で一晩培養した。翌日の顕微鏡下で細胞成長状況と細胞密度を観察した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

壁貼り細胞の継代については、以下の方法を参照することができる：

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.0.25%（w/v）-0.53 mM EDTAを培養瓶に入れ（T 25瓶1-2 mL、T 75瓶2-3 mL）、37℃培養箱に置いて1-2分間消化し（消化しにくい細胞は適切に消化時間を延長することができる）、その後顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、もし細胞の大部分が丸くなって脱落したら、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、3-4 mlの10%FBS含有培地を加えて消化を終了する。

3.軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上清を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1:2の割合で新T 25瓶に分け、説明書の要求に従って配置された6-8 mlの新しい培地を添加して細胞の成長活力を維持し、その後の継代は実際の状況に基づいて1:2 ~ 1:5の割合で行った。

3）細胞凍結保存：細胞を受け取った後、前3世代の培養時に細胞種子を凍結保存し、後続の実験に備えることを提案する。

RK-13（ウサギ腎細胞系）

商品属性

商品の紹介

年齢（性別） 5週齢

組織ソース 腎臓

せいちょうとくせい 壁細胞

細胞形態 上皮細胞様

生物安全等級 2

成長培地 MEM+10% FBS+1% P/S

推奨継代スケール 1:2-1:4

推奨液交換周波数 2～3回/週

とうけつじょうけん

凍結保存液：55%ベース培地+40%FBS+5%DMSO

温度：液体窒素

培養条件

気相：空気、95%；CO2の5％

温度：37℃

細胞継代培養操作手順：

（1）顕微鏡下で細胞形態と成長密度が90%に達した場合、継代を行う。

（2）培養液を吸引・廃棄する。PBSを加えて1 ~ 2回洗浄し、よく振って捨てた。

（3）ボトルの底を覆う量を加え、EDTAを含む。

（4）培養瓶を37℃の培養箱に入れて消化し、3 min程度で取り出し、細胞の80%を超える量がないか顕微鏡で観察し、収縮して丸くなり、細胞隙間が大きくなる。培養瓶を軽くたたいて残りの細胞を脱落させ、2倍量の消化停止を加え、消化過多を避けるために均等に吹き付ける。

（5）細胞懸濁液を遠心管内に吸引し、1000 rpm/minで3 ~ 5 min遠心した。

（6）上清を吸引廃棄し、培養液重懸濁細胞を加え、細胞を吹き付けて均一に分散させる。

（7）細胞懸濁液を吸引・廃棄し、適切な密度を選択して新しい培養瓶に接種し、培養液を補充し、均一に振盪し、37℃のCO 2培養箱に置いて培養する。

（8）細胞成長状態に基づいて液交換または継代時間を決定する。

（9）細胞凍結保存

細胞受容後の処理：

1）細胞を受け取った後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を37℃培養箱に置いて約2-3 h放置し、培養瓶の破損、液の溢れ及び細胞の汚染が発見された場合、写真を撮った後、直ちに連絡してください。

2）4または5 X顕微鏡下で細胞状態を確認し、同時に受け取ったばかりの細胞の写真（10×、20×）各2-3枚と培養瓶の外観写真1枚を保存して、アフターサービス時に受け取った時の細胞状態の根拠としてください。

3）壁貼り細胞：細胞は37℃培養箱に2-3 h放置し、顕微鏡下で細胞の成長と壁貼り状況を観察し、壁貼り細胞の中には宅配輸送中に振動により脱落と脱落後に塊になるものもある。鏡下観察細胞の成長密度が60%以下であれば、培養瓶中の灌液培地を除去し（壁に貼られていない細胞があれば遠心回収し、元培養瓶に再懸濁して打ち込む）、新たに調製した培地6-8 mLを加え、細胞培養箱に入れて培養を続けることができる。細胞成長密度が70〜80%以上に達すると、細胞を継代処理することができる。継代過程で輸送振動により脱落した細胞は遠心回収が必要である。

会社が販売している製品：

ラット三つ葉因子2（TFF 2）検査キット、英語名：TFF 2 ELISA Kit

Mouse signal ansduction molecule 7（Smad 7）ELISA Kitマウス信号伝達分子7（Smad 7）検出キット

Ratcarbonicanhydrase，CAELISAKitラット酵素（CA）検出キット96 T/48 T輸入分装

CLIAKitforHAase（HumanHyaluronidase）ELISAKitヒトヒアルロン酸酵素

細胞システイン-8（CASPASE-8）活性比色法定量測定キット20回

RatVascuolarcelladhesionmolecule 1，VCAM-1 ELISAKitラット血管内皮細胞接着分子1（VCAM-1/CD 106）検査キット規格：96 T/48 T

FZD 10組換えマウスFrizzled-10/FZD 10タンパク質（Fcラベル）（Fcラベル）Protein

Angiotensin II receptor（Ang II 0.5 mgAngiotensin II receptor（Ang II）アンジオテンシンII受容体（抗原）

TEK組換えヒトTie 2/CD 202 b/TEKタンパク質（His&GSTラベル）Protein

CSNK 1 G 2 Protein Human組換えヒトCSNK 1 G 2タンパク質

IL 20 RB Protein Rat組換えラットIL 20 RB蛋白（Fcラベル）

システイン阻害剤3（CST 3）組換えタンパク質Recombinant Cystatin 3（CST 3）

CSNK 1 G 2 Protein Human組換えヒトCSNK 1 G 2タンパク質

CST 6組換えマウスCystatin E/CST 6タンパク質Protein

KRC 1 Protein Cynomolgus組換えカニクイザルNKG 2 A/NKG 2/CD 159 A/KRC 1タンパク質（Fcラベル）

CSNK 2 A 2組換えヒトCSNK 2 A 2/CK 2 A 2蛋白Protein

RK-13 （ウサギ腎細胞系)マウス抗複合体（TAT）ELISAキット96 T/48 T

Rat parathyroid hormone（PTH）ELISA Kitラット副甲状腺ホルモン（PTH）検出キット

HumanGlucoseanspoer 1，GL 1 ELISAKitヒトグルコース輸送タンパク質1（GL 1）検査キット96 T/48 T輸入分装

Human 2,3-Disphosphoglycerate、2,3-DPG検出キットヒト2,3-ジ0酸グリセリン酸（2,3-DPG）検出キット規格：96 T/48 T

菌類/酵母細胞総RNA分離キット20回

MouseapoproteinB 100、apo-B 100 ELISAKitマウスリポ蛋白質B 100（apo-B 100）検出キット規格：96 T/48 T

マウス可溶性P-セレクタ（mouse sP-Selectin/sCD 62 P）作用：ELISA規格：輸入分装

ネズミ匹P物質（mouse Substance P）作用：ELISA規格：輸入分装

マウスプロラクチン（mouse PRL）作用：ELISA規格：輸入分装

マウスの妊娠（mouse PROG）作用：ELISA規格：輸入分装