SNU-C 5人直腸癌細胞

SNU-C 5人直腸癌細胞

商品属性

商品の紹介

種属源：人

性別年齢：77歳、アジア人女性

成長特性：壁貼り成長

細胞形態：上皮細胞様

細胞規格：1 x 106cells/T25または1ミリリットルとうけつトラップ

培養条件：RPMI-1640 中間+10% 胎児牛血清37℃CO2の5%

凍結保存条件：90%のFBS+10%のDMSO

継代方法：1:3継代, 2-3天伝1代

細胞処理：

1）凍結保存細胞の回復：

1 mLの細胞懸濁液を含む凍結貯蔵管を37℃の水浴中で急速に揺動解凍し、4-6 mLの培地を含む遠心管に加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で3〜5分間遠心分離し、上清を捨て、培地に細胞を再懸濁した。次いで、細胞懸濁液を6〜8 mlの培地を含む培養瓶（または皿）に加え、37℃で一晩培養した。翌日の顕微鏡下で細胞成長状況と細胞密度を観察した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

壁貼り細胞の継代については、以下の方法を参照することができる：

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.0.25%（w/v）-0.53 mM EDTAを培養瓶に入れ（T 25瓶1-2 mL、T 75瓶2-3 mL）、37℃培養箱に置いて1-2分間消化し（消化しにくい細胞は適切に消化時間を延長することができる）、その後顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、もし細胞の大部分が丸くなって脱落したら、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、3-4 mlの10%FBS含有培地を加えて消化を終了する。

3.軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上清を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1:2の割合で新T 25瓶に分け、説明書の要求に従って配置された6-8 mlの新しい培地を添加して細胞の成長活力を維持し、その後の継代は実際の状況に基づいて1:2 ~ 1:5の割合で行った。

3）細胞凍結保存：細胞を受け取った後、前3世代の培養時に細胞種子を凍結保存し、後続の実験に備えることを提案する。

細胞継代培養操作手順：

（1）顕微鏡下で細胞形態と成長密度が90%に達した場合、継代を行う。

（2）培養液を吸引・廃棄する。PBSを加えて1 ~ 2回洗浄し、よく振って捨てた。

（3）ボトルの底を覆う量を加え、EDTAを含む。

（4）培養瓶を37℃の培養箱に入れて消化し、3 min程度で取り出し、細胞の80%を超える量がないか顕微鏡で観察し、収縮して丸くなり、細胞隙間が大きくなる。培養瓶を軽くたたいて残りの細胞を脱落させ、2倍量の消化停止を加え、消化過多を避けるために均等に吹き付ける。

（5）細胞懸濁液を遠心管内に吸引し、1000 rpm/minで3 ~ 5 min遠心した。

（6）上清を吸引廃棄し、培養液重懸濁細胞を加え、細胞を吹き付けて均一に分散させる。

（7）細胞懸濁液を吸引・廃棄し、適切な密度を選択して新しい培養瓶に接種し、培養液を補充し、均一に振盪し、37℃のCO 2培養箱に置いて培養する。

（8）細胞成長状態に基づいて液交換または継代時間を決定する。

（9）細胞凍結保存

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細胞受容後の処理：

1）細胞を受け取った後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を37℃培養箱に置いて約2-3 h放置し、培養瓶の破損、液の溢れ及び細胞の汚染が発見された場合、写真を撮った後、直ちに連絡してください。

2）4または5 X顕微鏡下で細胞状態を確認し、同時に受け取ったばかりの細胞の写真（10×、20×）各2-3枚と培養瓶の外観写真1枚を保存して、アフターサービス時に受け取った時の細胞状態の根拠としてください。

3）壁貼り細胞：細胞は37℃培養箱に2-3 h放置し、顕微鏡下で細胞の成長と壁貼り状況を観察し、壁貼り細胞の中には宅配輸送中に振動により脱落と脱落後に塊になるものもある。鏡下観察細胞の成長密度が60%以下であれば、培養瓶中の灌液培地を除去し（壁に貼られていない細胞があれば遠心回収し、元培養瓶に再懸濁して打ち込む）、新たに調製した培地6-8 mLを加え、細胞培養箱に入れて培養を続けることができる。細胞成長密度が70〜80%以上に達すると、細胞を継代処理することができる。継代過程で輸送振動により脱落した細胞は遠心回収が必要である。