ラット骨膜幹細胞

細胞の概要：

骨膜は骨表面を覆う結合組織の層である。骨膜は夏皮式繊維を通じて骨にアンカーされ、外部筋肉組織と内部骨の連結橋として機能し、この構造は骨膜の完全性を維持するのに役立つ。

骨膜は2つの部分から構成され、外層が粗い繊維層と内層が緻密な細胞層、繊維層には繊維形成細胞、コラーゲン繊維、弾力繊維及び微小管などが含まれている。細胞層には骨膜源幹細胞が多く、この幹細胞は骨髄源の間葉質幹細胞と類似しており、多方向分化の可能性がある。

骨修復、再形成、更新は骨膜中の幹細胞と密接に関連している。正常な生理状況において、骨膜組織は骨更新及び再形成を維持する役割を果たしており、その中の幹細胞は膜内骨形成方式によって骨形成細胞に分化することもでき、軟骨内骨形成方式によって軟骨細胞に分化することもできる。

さいぼうとくせい：

1） 細胞は実験動物の正常な関節骨膜組織に由来する。

2)細胞同定：CD90またはCD73蛍光染色は陽性であった。

3)同定された細胞は純度が高い90%。

4)含まないHIV-1、 HBV の、HCV の、マイコプラズマ、、酵母、および。

5)細胞成長方式：線維様細胞を形成し、壁に貼り付けて培養する。

推奨培地：

お勧めデルフ原代 上皮 細胞培養システム この細胞の培養試薬として。

実験報告：

一、分離と育成：

1、無菌条件下で、1-3 d齢SDラット心房組織を取り出し、その後PBSでこの組織塊を2回洗浄し、組織を1 mm 3程度の大きさに切断した、

2、組織塊に4 mLの酵素消化液（0.1%と0.1%I型コラーゲン）を添加し、10 s懸濁し、37℃の条件下で10 min消化し、その後スポイトで吹き付けて単細胞懸濁液を作成し、自然沈殿し、上清を収集し、10%FBS含有培地で消化を終了した後、4℃で放置する。

3、残りの組織はさらに3〜4 mLの酵素消化液を加え、10 s懸濁し、37℃で10分間消化した後、上述の方法で上澄みを収集し、消化を終了した後、4℃で放置し、この手順を2〜3回繰り返し、組織が消化されるまで、

4、200目ステンレススクリーンで細胞消化液を濾過し、1200 r/minで10 min遠心分離し、上清を捨て、沈殿細胞を10%FBS DMEM/F 12含有培地で混合懸濁し、25 cm 2培養瓶に接種し、37℃、5%CO 2培養箱に放置して培養する。

5、差速壁貼付1 h後、培地を吸引し、実験の必要に応じて6ウェルプレートに接種して培養を継続する、二、免疫蛍光鑑定：

1、心房筋細胞の成長を80%融合まで待っている時、培地を捨て、培養したPBSで細胞を2回洗浄し、毎回10分間、その後4%パラホルムアルデヒドで室温条件下で細胞を15分間固定する、

2、PBSで細胞を2回洗浄し、毎回10分間、その後4℃の条件下で、0.1%TritonX-100で15分間膜を透過した、

3、PBSで細胞を2回洗浄し、毎回10 min、それから室温条件下で、4%BSAで細胞を30 min閉鎖する、

4、α-actin一抗を1：100の割合で希釈し、それを4℃の冷蔵庫に入れて細胞を一晩インキュベートする、

5、PBS細胞を3回洗浄し、毎回10 min、1：150の割合で抗α-actinの二抗を希釈し、37℃条件下で1時間放置する、

6、PBSで3回洗浄し、毎回10分間、逆さま蛍光顕微鏡下で画像を観察し、写真を撮る。

会社が販売している製品：

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注意事項：

1.細胞を受け取った後、まず細胞瓶が完全かどうか、培養液の液漏れ、濁りなどの現象があるかどうかを観察し、もし上記の現象が発生したら、直ちに私たちに連絡してください。

2.細胞説明書をよく読み、細胞の形態、使用する培地、血清の割合、必要なサイトカインなどの細胞関連情報を理解し、細胞培養条件の一致を確保し、培養条件の不一致により細胞に問題が発生した場合、責任は顧客自身が負う。

3.75%アルコールで細胞瓶表面を拭き、顕微鏡下で細胞状態を観察する。輸送問題のため、一部の細胞は温度変化と激しい衝突により破砕して破片を形成し、正常な現象である。細胞状態を観察した後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を37℃培養箱に4〜6時間置いた。

4.壁貼り細胞は消化でき、懸濁細胞は直接混合して細胞を収集し、900 rpm-1000 rpmは3分間遠心分離し、上清を捨てる。PBS再懸濁細胞5 mLを加え、さらに900 rpm-1000 rpmで3分間遠心分離し、新鮮な*培地で細胞を再懸濁し、新しい培養瓶または培養皿に接種し、培養箱に入れて培養した。

5.顧客に細胞培養のために同じ条件の培地を使用してもらう。

6.お客様は細胞を受け取ってから3日前にそれぞれ何枚かの細胞写真を撮り、細胞状態を記録し、弊社技術部とのコミュニケーションを容易にすることを提案する。輸送の原因で、個別の敏感細胞に不安定な状況が発生することがあります。直ちに私たちに連絡して、細胞の具体的な状況を知らせて、私たちの技術者が問題が解決するまで訪問を追跡するために。

7.この細胞は科学研究用にのみ使用される。

8.備考：輸送用の培地（灌液培地）は細胞の培養には使用できません。説明書の細胞培養条件に従って新しく調製された＊培地と交換して細胞を培養してください。細胞後次継代提案を受けた1：2継代。

9.注意：1：2継代は1つのT 25瓶を2つのT 25瓶または2つの6 cm皿に渡すことである。1つのT 25瓶に2つの10 cm皿を渡すのではありません。