ラット強膜上皮細胞

実験報告：

一、分離と育成：

1、無菌条件下で、1-3 d齢SDラット心房組織を取り出し、その後PBSでこの組織塊を2回洗浄し、組織を1 mm 3程度の大きさに切断した、

2、組織塊に4 mLの酵素消化液（0.1%と0.1%I型コラーゲン）を添加し、10 s懸濁し、37℃の条件下で10 min消化し、その後スポイトで吹き付けて単細胞懸濁液を作成し、自然沈殿し、上清を収集し、10%FBS含有培地で消化を終了した後、4℃で放置する。

3、残りの組織はさらに3〜4 mLの酵素消化液を加え、10 s懸濁し、37℃で10分間消化した後、上述の方法で上澄みを収集し、消化を終了した後、4℃で放置し、この手順を2〜3回繰り返し、組織が消化されるまで、

4、200目ステンレススクリーンで細胞消化液を濾過し、1200 r/minで10 min遠心分離し、上清を捨て、沈殿細胞を10%FBS DMEM/F 12含有培地で混合懸濁し、25 cm 2培養瓶に接種し、37℃、5%CO 2培養箱に放置して培養する。

5、差速壁貼付1 h後、培地を吸引し、実験の必要に応じて6ウェルプレートに接種して培養を継続する、二、免疫蛍光鑑定：

1、心房筋細胞の成長を80%融合まで待っている時、培地を捨て、培養したPBSで細胞を2回洗浄し、毎回10分間、その後4%パラホルムアルデヒドで室温条件下で細胞を15分間固定する、

2、PBSで細胞を2回洗浄し、毎回10分間、その後4℃の条件下で、0.1%TritonX-100で15分間膜を透過した、

3、PBSで細胞を2回洗浄し、毎回10 min、それから室温条件下で、4%BSAで細胞を30 min閉鎖する、

4、α-actin一抗を1：100の割合で希釈し、それを4℃の冷蔵庫に入れて細胞を一晩インキュベートする、

5、PBS細胞を3回洗浄し、毎回10 min、1：150の割合で抗α-actinの二抗を希釈し、37℃条件下で1時間放置する、

6、PBSで3回洗浄し、毎回10分間、逆さま蛍光顕微鏡下で画像を観察し、写真を撮る。

細胞の概要：

強膜は眼球壁の外側の層であり、緻密なコラーゲンと弾性繊維から構成され、その構造は強靭で不透明である。強膜前縁は角膜縁に接し、後方は視神経の硬膜鞘と続いている。

強膜は外向内から強膜上層、主質層、強膜下層その中の上層は上皮細胞で構成されている。

細胞特性：

1） 組織は実験動物の正常な眼組織に由来する。

2)細胞同定：広スペクトルケラチン（PCK）蛍光染色は陽性であった。

3)同定された細胞は純度が高い90%。

4)含まないHIV 1型、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、マイコプラズマ、、酵母、および。

5)細胞成長方式：上皮様、不規則細胞、壁貼り培養。

推奨培地：

お勧めデルフト原代 上皮 細胞培養システム 体外培養の培地として。

注意事項：

1.細胞を受け取った後、まず細胞瓶が完全かどうか、培養液の液漏れ、濁りなどの現象があるかどうかを観察し、もし上記の現象が発生したら、直ちに私たちに連絡してください。

2.細胞説明書をよく読み、細胞の形態、使用する培地、血清の割合、必要なサイトカインなどの細胞関連情報を理解し、細胞培養条件の一致を確保し、培養条件の不一致によって細胞に問題が発生した場合、責任は顧客自身が負う。

3.75%アルコールで細胞瓶表面を拭き、顕微鏡下で細胞状態を観察する。輸送問題のため、一部の細胞は温度変化と激しい衝突により破砕して破片を形成し、正常な現象である。細胞状態を観察した後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を37℃培養箱に4〜6時間置いた。

4.壁貼り細胞は消化でき、懸濁細胞は直接混合して細胞を収集し、900 rpm-1000 rpmは3分間遠心分離し、上清を捨てる。PBS再懸濁細胞5 mLを加え、さらに900 rpm-1000 rpmで3分間遠心分離し、新鮮な*培地で細胞を再懸濁し、新しい培養瓶または培養皿に接種し、培養箱に入れて培養した。

5.顧客に細胞培養のために同じ条件の培地を使用してもらう。

6.お客様は細胞を受け取ってから3日前にそれぞれ何枚かの細胞写真を撮り、細胞状態を記録し、弊社技術部とのコミュニケーションを容易にすることを提案する。輸送の原因で、個別の敏感細胞に不安定な状況が発生することがあります。直ちに私たちに連絡して、細胞の具体的な状況を知らせて、私たちの技術者が問題が解決するまで訪問を追跡するために。

7.この細胞は科学研究用にのみ使用される。

8.備考：輸送用培地（灌液培地）は細胞の培養には使用できません。説明書の細胞培養条件に従って新しく調製された＊培地と交換して細胞を培養してください。細胞後次継代提案を受けた1：2継代。

9.注意：1：2継代は1つのT 25瓶を2つのT 25瓶または2つの6 cm皿に渡すことである。1つのT 25瓶に2つの10 cm皿を渡すのではありません。

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