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補酵素I NAD(H)含有量試験箱微量法

交渉可能更新02/19
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原産地
概要
補酵素I NAD(H)含有量試験ボックス微量法会社が販売している製品:IgG-Fcフラグメント低親和性受容体III b(FcγR 3 B)組換えタンパク質Recombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor(FcgR 3 B)Juxtanodinタンパク質(JN)組換えタンパク質Recombinant Juxtanodin(JN)Kruppel様因子4(KLF 4)組換えタンパク質Recomb
製品詳細

本キットは研究用に会社の実験室を使用して無料の代理測定を提供し、7つの作業日の出結果、オリジナルデータを提供するために提供されます!

製品名 仕様 検出方法 品番
補酵素I NAD(H)含有量試験箱微量法 100管/48様 びりょうほう BK-S01321型

商品紹介:

測定意義
補酵素I NAD(H)は動物、植物、微生物、培養細胞に広く存在し、NAD+は酵母分解(EMP)とトリカルボン酸循環(TCA)の主要な水素受容体であり、生成されたNADHは呼吸電子鎖(ETC)を介して酸素に電子を渡し、ATPを合成すると同時に、大量のROSを形成し、同時にNADHはNAD+に再生する。糖、脂質、タンパク質の3大代謝物質分解における酸化反応の大部分はこの系によって完成される。NAD(H)含有量とNADH/NAD+比の高低は、発酵分解とTCAサイクルの強弱を評価するために使用することができる。高いNAD(H)及びNADH/NAD+比は細胞呼吸の酸素消費量が高く、過酸化状態にあることを示している。また、NADH/NAD+比の上昇は、サッカリン分解及びTCAサイクルを抑制することもできる。また、NAD+分解生成物は細胞信号伝導、代謝、遺伝子発現などに対して重要な制御作用を有する。
そくていげんり
それぞれ酸性とアルカリ性抽出液を用いてサンプル中のNAD+とNADHを抽出し、NADHはPMSの水素移動作用を通じて、還元酸化型チアゾールブルー(MTT)はメチルレトニウムであり、570 nmで吸光値を検出した、一方、NAD+はエタノール脱水素酵素によりNADHに還元され、さらにMTT還元法を用いて測定することができる。
持参する必要がある機器や用品
分光光度計/酵素スケール、卓上遠心分離機、ピペット、微量石英比色皿/96孔板、すり鉢、氷、蒸留水が見られる。

試薬の組成と調製:

抽出液:液体100 mL×1本、4℃保存。

試薬一:液体5 mL×1本、4℃遮光保存。

試薬二:液体15 mL×1本、4℃で保存する。

試薬三:液体3 mL×1本、4℃で保存する。

試薬四:液体3 mL×1本、4℃で保存する。
11.png

実験結果は私には妙技があると判断した:
1、定量測定結果は標準曲線に基づいてサンプル中の測定対象物の含有量を計算する。
2、サンプルウェルのOD値が陰性対照OD値+2〜3 SDより大きいことを陽性結果の閾値とする。
3、P/N値(陽性ホールOD値/陰性ホールOD値)が2.1以上で陽性、P/N値が2.1未満、しかし1.5以上で疑わしい、P/Nが1.5未満で陰性である。
4、ELISAキット目測定性法:基質を添加して酵素分解と終止反応を経た後、肉眼で観察した陽性孔の色は明らかに(競争法則が浅い)陰性対照より深く、陰性対照の色に近い者は、陰性と判定した。
一般的に使用される不安定試薬の分類と要件を共有します。
①揮発性で低発火点の試薬は密封し、日陰、通風、火元から離れた場所に保管しなければならない。
②水蒸気、水と反応する物質は密封し、水源から離れて保存する。
③酸素と作用しやすい試薬は、固体または結晶を密封保存し、長期にわたって水溶液、亜硫酸、水素硫酸溶液を密封保存し、カリウム、ナトリウム、白リンはさらに液封形式を採用しなければならない。
④二酸化炭素と反応する物質は密封保存し、その分の溶液は固体より反応しやすいので、密封保存に注意する。
⑤揮発性または自己分解性の試薬は密封し、冷暗換気所に保管しなければならない。

操作手順:

1.サンプルの準備:

a.細胞サンプルの準備:細胞を収集し、4℃または氷浴で予冷したPBSまたは生理食塩水で1〜2回洗浄する。沈殿用予冷組織細胞分解液4℃または氷浴ホモジナイザ(ガラスホモジナイザまたは各種一般的な電動ホモジナイザを使用することができる)。その後、スラリーを4℃で遠心分離し、測定試料として上清を採取した。

b.組織試料の準備:動物用生理食塩水(0.9%NaCl、0.16 mg/ml含有)を灌流して血液を除去した後、組織試料を取得する。100 mg当たり500〜1000 ulの組織細胞溶解液の割合、4℃または氷浴ホモジナイザーを添加する(ガラスホモジナイザーまたは各種一般的な電動ホモジナイザーを使用することができる)。その後、スラリーを4℃で遠心分離し、測定試料として上清を採取した。

d.BCAタンパク質濃度測定キット(P 1511)を用いてタンパク質濃度を測定した。通常10−20 ugタンパク質の細胞または組織均質スラリー試料中のSOD平均活性は約1個の活性単位程度である(異なる細胞と組織の差は比較的に大きく、この活性範囲は初歩的な参考としてのみ)。各サンプルについて20〜100 ugのタンパク質量を準備することは、通常、後続の検出のために十分である。

e.タンパク質濃度と予想されるタンパク質使用量に基づいて、キットから供給されるSOD検出緩衝液でサンプルを適切に希釈する。例えば、マウス肝臓は通常10〜100倍希釈する必要がある。準備したサンプルは当日測定すれば、氷浴で保存することができます。当日に測定を完了できなければ、-70℃で凍結保存することができますが、できるだけ当日に測定を完了することをお勧めします。

2.キットの準備:

a.WST-8酵素作動液の調製:下表を参照し、測定すべきサンプル(標準品を含む)の数量に基づいて、適量のWST-8酵素作動液を調製し、調製したWST-8酵素作動液を4℃または氷浴で保存し、当日使用することができるが、できるだけ現用することを提案する。

注意:酵素溶液の使用量が少なく沈降しやすいため、使用前に軽く遠心分離し、適切に混ぜてから使用することに注意しなければならない。

b.反応起動作動液の調製:キットから供給された反応起動液(40 X)を溶解して混合し、1μlの反応起動液(40 X)に39μlのSOD検出緩衝液を添加する割合で希釈し、すなわち反応起動作動液である。4℃または氷浴で保存し、当日使用することができますが、できるだけ現配合で使用することをお勧めします。

c.(オプションで)SOD標準品の準備:SOD標準品を持参し、本キットに提供される希釈液を用いてSOD標準品を以下のシリーズ濃度:20 U/ml、10 U/ml、5 U/ml、2.5 U/ml、1.25 U/ml、0.625 U/mlに希釈する必要がある。その後の測定では20マイクロリットルずつ採取し、サンプルを参考にして測定することができる。説明:希釈後のSOD酵素活性の低下を避けるために、SOD標準品は希釈して現在使用するべきである、本キットはSODの検出には標準品としてSODを必要としないが、陽性対照としてSOD標準品を使用したり、SOD活性定量の参考としたりすることができる。

AHA 3 AHA 3抗体(セトシナクサ)

Phospho−ATP 1 A 1(Ser 23)リン酸化ナトリウムカリウムATP酵素タンパク質a 1抗体

phospho-SK 1(Ser 83)リン酸化アポトーシスシグナル調節キナーゼ1抗体

AADACL 1中性エステル加水分解酵素1抗体

アストロキシテヒト星状膠細胞抗体

Aldolase AアルデヒドA抗体

Annexin VI膜ブロッキング蛋白質6抗体

beta-Amyloid(25-35)βアミロイド(25-35)抗体

Angiotensin IアンジオテンシンI抗体

Adrenomedullin副腎髄質抗体(N末端20ペプチド)

Arfaptin 2 ADPリボソーム化因子結合蛋白2抗体

AVPR 2加圧ホルモン受容体2抗体

ASCアポトーシス関連スポットグロブリンASC抗体

Afadin糸状アクチン結合蛋白抗体

アンチトロンビン III抗3抗体

Serum albumin(3 F 4)ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体

CUB帯状瘡疹透過領域スプライン1(CUZD 1)組換えタンパク質Recombinant CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1(CUZD 1)

C−型凝集体ドメインファミリー11メンバーA(CLEC 11 A)組換えタンパク質Recombinant C−Type Lectin Domain Family 11、Member A(CLEC 11 A)

C−型凝集体ドメインファミリー2メンバーC(CLEC 2 C)組換えタンパク質Recombinant C−Type Lectin Domain Family 2,Member C(CLEC 2 C)

Dermokineタンパク質(DMKN)組換えタンパク質Recombinant Dermokine(DMKN)

Dickkopf関連タンパク質2(DKK 2)組換えタンパク質Recombinant Dickkopf Related Protein 2(DKK 2)

Discs大同源物関連タンパク質5(DLGAP 5)組換えタンパク質Recombinant Discs,Large Homolog Associated Protein 5(DLGAP 5)

EGFスプライン6(EGFL 6)組換えタンパク質Recombinant EGF Like Domain Protein,Multiple 6(EGFL 6)

EGFスプライン7(EGFL 7)組換えタンパク質Recombinant EGF Like Domain Protein,Multiple 7(EGFL 7)

Enah/Vasp様蛋白(EVL)組換え蛋白質Recombinant Enah/Vasp Like Protein(EVL)

FK 506結合グロブリン(FKBPL)組換えタンパク質Recombinant FK 506 Binding Protein Like Protein(FKBPL)

補酵素I NAD(H)含有量試験箱微量法FMS様Flt 3)組換えタンパク質Recombinant FMS Like Tyrosine Kinase 3(Flt 3)

GATA結合蛋白3(GATA 3)組換え蛋白Recombinant GATA Binding Protein 3(GATA 3)

GATA結合蛋白4(GATA 4)組換え蛋白Recombinant GATA Binding Protein 4(GATA 4)

Gタンパク質カップリング受容体ファミリーC 5グループメンバーA(GPRC 5 A)組換えタンパク質Recombinant G Protein Coupled Receptor、Family C、Group 5、Member A(GPRC 5 A)

HtrA肽酶1 (HTRA1)重组蛋白 再組み合わせHtrAセリンペプチダーゼ1(HTRA1)

HtrA 4(HTRA 4)組換えタンパク質Recombinant HtrA Serine Peptidase 4(HTRA 4)