A 498人腎癌細胞専用培地説明書

製品概要：

A-498細胞専用培地は技術チームが入念に最適化し、長期テストを経て、本製品はA-498細胞の良好な成長状態を維持することができる。本製品には、A-498細胞の成長に必要な様々な成分が含まれており、何の成分も添加する必要はなく、A-498細胞のインビトロ培養に直接使用することができる。本製品はさらなる科学研究のためだけに使用され、診断、治療、臨床、家庭及びその他の用途に使用されてはならない。

細胞培養の具体的な手順：

一、常用設備

1. 準備室の設備

単蒸留水蒸留器、二重蒸留水蒸留器、酸シリンダー、オーブン、高圧鍋、貯蔵キャビネット（未消毒品を置く）、貯蔵キャビネット（消毒済み品を置く）、包装台。配液室の設備：トルク天秤と電子天秤（薬品秤量）、PH 値けいりょうPH 値値）、磁気攪拌器（溶液室攪拌溶液を配置）。

2. 培養室の設備

液体窒素タンク、貯蔵キャビネット（雑物保管）、蛍光灯と紫外線ランプ、空気清浄機システム、低温冷蔵庫（-80℃）、エアコン、二酸化炭素シリンダーボトル、サイドテーブル（実験記録を書く）。

3. 無菌室に置かなければならない設備

遠心分離機（細胞収集）、超清浄テーブル、倒置顕微鏡、二酸化炭素インキュベーションタンク（インキュベーション培養物）、水浴釜、三酸素消毒殺菌機、4℃冷蔵庫（放置血清及び培養用液）。

二、無菌操作

（一）無菌室の滅菌

1.無菌室の定期的な掃除：週に1回、水道水で床を引きずったり、テーブルを拭いたり、テーブルをきれいにしたりしてから、3‰来ソ爾か新潔爾滅か0.5%過酸素酢酸拭き取り。

2.二酸化炭素インキュベーションタンク（培養箱）滅菌：先に使用3‰新ジェルは消して拭き、そして75%アルコール拭き取りまたは0.5%過酸素酢酸を加え、紫外線ランプを照射した。

3.実験前滅菌：紫外線ランプ、三酸素殺菌機、空気清浄機システムの各20-30分です。

4.実験後滅菌：用75%アルコール（3‰新潔爾滅）超浄台、辺台、倒置顕微鏡の載物台を拭く。

細胞培養方法：

01 初代培養操作手順

初代培養の操作手順は：取材→分離→培養する。

（1）取材：異なる組織に対して異なる取材方法があるが、すべて材料の新鮮さと厳格な無菌を維持しなければならない。

細胞継代培養操作手順は以下の通りである：

（1）継代前に倒置顕微鏡下で細胞形態と成長密度を観察し、細胞成長密度が80%~90%時に、継代を行うことができます。

（2）培養瓶内の培養液を吸引または廃棄する。加入PBS洗浄1~2回、左右に軽く振って捨てます。

（3）培養瓶の大きさに応じて瓶に適量を加えて含むEDTAの場合、一般的には培養瓶の底全体を覆うべきである。

（4）培養瓶を入れる37℃ 二酸化炭素培養箱を消化し、2〜5分を取り出して逆さま顕微鏡下に置いて観察し、70%~80%細胞が収縮して丸くなり、細胞ギャップが大きくなった場合は、培養瓶を軽くたたいて残りの細胞を脱落させ、すぐに加える2倍量の培養液は消化を中止し、吸込ヘッドを用いて軽く吹きつけ、消化過多を防ぐために均一に混合した。

（5）遠心管内に全細胞懸濁液を吸引し、1000rpm/分遠心分離3~5分。

（6）上清を捨て、適量の培養液を加えて細胞を再懸濁し、軽く吹き混ぜ、細胞を均一に分散させる。

（7）吸頭を用いて適量の細胞懸濁液を吸収し、適切な密度で新しい培養瓶に接種し、培養液を補充し、均一に揺らし、37℃ 二酸化炭素培養箱で培養する。

（8）細胞成長状態に基づいて液交換または継代時間を決定し、さらに細胞凍結保存を行う。

注意事項：

（1）厳格に無菌操作を行い、使用するすべての試薬及び消耗品は無菌であり、かつ無菌超浄テーブルに紫外線照射しなければならない30分以上により、細胞に汚染が発生しないようにする。

（2）使用する培養液は細胞の生存と成長に適していなければならない。異なる動物種、組織型の細胞に由来し、培養液に対する要求は異なり、必要に応じて予備実験の方法で適切な培養液を選択することができる。

（3）胎牛血清は細胞生存を維持し、細胞成長を促進するために重要な役割を果たしている。適切なウシ胎児血清は、文献または予備実験に基づいて選択することができる。確定したら、実験が完了するまで使用しなければならない。

（4）細胞を消化する時、消化時間が短すぎて消化不能になることを避けるべきで、収集した細胞の数が少ない、あるいは消化時間が長すぎて細胞が塊のように綿状に遊離することを招いて、この時の細胞はすでに損傷あるいは死亡して、細胞の数と実験の進度に影響している。

（5）細胞が遠心分離する時、遠心力が小さすぎて収集した細胞の数が不足したり、遠心力が大きすぎて細胞に損傷を与えたりしないようにしなければならない。遠心分離後の細胞沈殿物を上清に捨てた後、まず細胞沈殿物を弾散し、培養液を加えて再懸濁しなければならない。このように直接吹きつけるより細胞損傷が小さく、細胞活性率を高めることができる。

（6）細胞を吹き付ける時、できるだけ細胞の発生を避けるべきで、細胞を傷つけないようにして、細胞の状態に影響する（吹き付ける過程で残留部分の液体は吸込頭内で気泡の発生を減らすことができる）。

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