Cell Counting Kit-8細胞増殖検出キット

Cell Counting Kit-8（CCK-8）細胞増殖キット

製品番号：C 6005 M

製品仕様：500 T

保管条件：4℃遮光保存、長期保存-20℃，有効期限は外装を参照。

製品紹介：

細胞計数キット-8略称オクタペプチド胆嚢収縮素（またはWST-8）キットは、WST-8（化学名：2-(2-メトキシ基-4-ニトロフェニル基)-3-(4-ニトロフェニル基)-5-(2,4-ジスルホベンゼン)-2時間-テトラゾールモノナトリウム塩）発色反応の広範な応用は細胞増殖と細胞毒性の高速高感度検査キットである。

WST-8動作原理：電子結合試薬の存在下で、ミトコンドリア内の脱水素酵素によって還元されて高度の水溶性を有するオレンジイエローのメチルアミン生成物（メチルアミン）。色の濃淡は細胞の増殖に比例し、細胞毒性に反比例する。酵素スケールを使用して450ナノメートル波長測定OD値であり、生細胞数を間接的に反映する。

WST-8はいMTTのアップグレード代替製品、およびMTTまたはその他MTT類似製品テトラゾリウム塩、MTSなどに比べて明らかな利点がある。まず、MTTミトコンドリア内のいくつかの脱水素酵素によって還元されて生成されるメチルアミンは水溶性ではなく、溶解するために特定の溶解液が必要である、そしてWST-8、XTTとMTS生成されたメチルアミンはすべて水溶性であり、その後の溶解工程を省くことができる。次に、WST-8発生したメチルアミン比XTTとMTS発生したメチルアミジンはより溶解しやすい。もう一度、WST-8比XTTとMTSより安定し、実験結果をより安定させる。また、WST-8とMTT、XTT線形範囲より広く、感度が高い。

CCK法は薬物スクリーニング、細胞増殖測定、細胞毒性測定、腫瘍薬感受性試験及び生体因子の活性測定などの方面に広く応用されている。

使用方法：

1.細胞活性検査

（1)が96 孔板に細胞懸濁液を接種する（100μL/穴)、設定できることをお勧めします8 個の細胞濃度勾配、各濃度設定6 個の繰り返しによる細胞舗装、例えば細胞数0/3125/625/125/1500/5000/1000/2000細胞/96孔板を敷く。培養プレートを培養箱に入れて一晩培養した（37℃,5%一酸化炭素2）。

（2）穴ごとに追加10μL CCK溶液（穴に気泡を生成しないように注意してください。影響します。OD値の読み取り）。注：製品の析出があれば、37℃水浴処理は、使用に影響しません。

（3）培養プレートを培養箱内でインキュベートする0.5～4時間注：最初の実験は0.5、1、2 と4時間その後、それぞれ酵素スケールを用いて測定し、その後、吸光度範囲が比較的適切な時点を後続の実験に用いた。

（4）酵素スケールを用いて450ナノメートルと600ナノメートル（オリフィスプレートの底部干渉を除去）における吸光度。 （5）しばらく測定しない場合OD値、穴ごとに追加可能10μL 0.1 MのHCl溶液または1%w/vラウリル硫酸ナトリウム溶液を加え、培養プレートを室温条件下で遮光保存した。24時間内部測定では、吸光度は変化しない。

2.細胞増殖−毒性検査

（1)が96 オリフィスプレートへの接種100μLの細胞懸濁液を設定することをお勧めします8 個の細胞濃度勾配、各濃度設定6 個の繰り返しによる細胞舗装、例えば細胞数0/3125/625/125/1500/5000/1000/2000細胞/96孔板を敷く。培養プレートを培養箱に入れて一晩培養した（37℃, 5%一酸化炭素2）

（2）培養プレートへの添加1-10μL特定の薬物刺激。

（3）培養箱内で一定期間（例：6、12、24 または48時間）。

（4）穴ごとに追加10μL CCK溶液（穴に気泡を生成しないように注意してください。影響します。OD値の読み取り）。注：製品の析出があれば、37℃水浴処理は、使用に影響しません。

（5）培養プレートを培養箱内でインキュベートする0.5～4時間注：最初の実験は0.5、1、2 と4時間その後、それぞれ酵素スケールを用いて測定し、その後、吸光度範囲が比較的適切な時点を後続の実験に用いた。

（6）酵素スケールを用いて450ナノメートルと600ナノメートル（オリフィスプレートの底部干渉を除去）における吸光度。

（7）しばらく測定しない場合OD値、穴ごとに追加可能10μL 0.1 MのHCl溶液または1%w/vラウリル硫酸ナトリウム溶液を被覆し、培養プレートを遮光して室温条件下に保存した。24時間内部測定では、吸光度は変化しない。

注：測定対象物質に酸化性または還元性がある場合は、CCK前に新鮮な培地を交換し（培地を除去し、培地で細胞を2回洗浄した後、新しい培地を加えた）、薬物影響を除去した。もちろん薬物の影響が比較的小さい場合は、培地を交換することなく、培地に薬物を加えた後の空白吸収を直接差し引けばよい。

3.計算式

細胞生存率=[（As抗体）/（Ac抗体）]xよくせいりつ=[（Ac-As）/（Ac-Ab）]xAs：じっけんこう(細胞を含む培地、オクタペプチド、測定待ち薬物)の吸光度AC電源：コントロールホール(細胞を含む培地、オクタペプチド、未測定薬がない)の吸光度Ab：ブランクホール(細胞および測定対象薬物を含まない培地、CCK-8）の吸光度

注意事項

1. 使用前に製品を瞬時に管底まで遠心分離し、その後の実験を行ってください。

2. 使用する96孔は細胞敷板を行い、培養時間が長い場合は蒸発問題に注意しなければならない。周囲を一回り捨てる方法で、同量の公共放送サービス、水または培養液。

3. 酵素スケールで測定する前に、穴ごとに気泡がないことを確保しなければならない。そうしないと測定に干渉する。

4. 本製品は科学研究に限られ、臨床診断や治療に使用してはならず、食品や薬品に使用してはならず、一般住宅に保管してはならない。

5. 安全と健康のために、実験服を着て使い捨て手袋をはめて操作してください。