AKR細胞

製品名：AKR細胞

AKR細胞後処理へ

細胞を培養瓶で良好な状態に培養した後、培養液を充填し、瓶の口を密封するのは細胞輸送の方法である。細胞を受け取って自分の実験室に戻ったら、まず外装を開けて、75%アルコール散布瓶全体を消毒した後、超浄台内に置き、厳格に無菌操作する，培養箱の静置2～4時間。鏡下観察：超えていない合流度80%の場合、瓶詰めの培養液を遠心管に集めるに参加する培地6 ml、投入37℃、5%CO 2インキュベーションタンク培養、80%の合流度を超える場合、状況に応じて継代または凍結保存し、具体的な操作は細胞培養ステップを参照する。（注意出荷されているのが密封培養瓶の場合は、培養箱に入れて培養瓶の蓋を緩め、継代後に1本は原瓶の中の培地を、もう1本は自分で配合した培地を使うことをお勧めします）

AKRマウス食道癌細胞培養手順

一、ふっきゅうさいぼう:を含む1 mL細胞懸濁液の凍結保存管を37℃水浴中で急速に揺動解凍し、5 mL培地を加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で5分間遠心分離し、上澄み液を捨て、補充する4-6mL培地後に均等に吹き付ける。その後、すべての細胞懸濁液を培養瓶に一晩添加して培養する（または細胞懸濁液を添加する）6 cm皿）、一晩培養する。翌日に液を交換し、細胞密度を検査した。

二、細胞継代：細胞密度が80%〜90%で、継代培養を行うことができる。

（a）、壁貼り細胞について、継代は以下の方法を参考することができる：

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.プラス1-消化液2 ml（0.25%Trypsin-0.53 mM EDTA）をフラスコ中に入れ、37℃培養箱中で消化した1-2分、そして顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、もし細胞の大部分が丸くなって脱落したら、速やかに操作台に戻し、培養瓶を何回か軽くたたいてから加える5 ml以上含む10%血清の培地は消化を停止する。

3.細胞を軽く吹き付け、脱落後に吸引し、1000 RPM条件下で8-10分間遠心分離し、上澄み液を捨て、1-2 mLの培養液を補充した後、均等に吹き付ける。

4.を押します5-6ml/瓶に培養液を補充し、細胞懸濁液を1：2の割合で新しい含有量に分けた5-6ml培養液の新しい皿または瓶の中。

（b））、に対して浮遊細胞、継代は以下の方法を参照することができる：

方法1：細胞を収集し、1000 RPM条件下で8〜10分間遠心分離し、上澄み液を捨て、1〜2 mlの培養液を補充した後、均等に吹き付け、細胞懸濁液を1：2〜1：5の割合で新しい8 ml培地を含む新しい皿または瓶に分けた。

方法2：半数の液交換方式を選択でき、半数の培地を捨てた後、残りの細胞を懸濁し、細胞懸濁液を1：2〜1：3の割合で、8 mlの培地を含む新しい皿または瓶に分けた。

PS：お客様が受信した場合2 mlの小管細胞は、細胞を受け取った後、75%のアルコールをスプレーして管全体を消毒した後、超浄台または安全棚に入れ、厳密に無菌操作する。小管細胞をT 25培養ビンまたは6cmシャーレ、添加5ml左右の培地を混合し、培養箱に入れて一晩培養した後、細胞密度を見た：もし密度が超えていなければ80%、交換液は引き続き培養し、状況に応じて継代または凍結保存する。もし密度が80%で、直接継代を行うことができます（方法は上）。

三、細胞凍結保存：（注：無血清凍結貯留液凍結貯留細胞の方法は弊社の商品番号を参考してください：C7001型）

1、細胞は培養瓶を覆うまで成長した80%面積の場合、25 cm 2培養瓶の培養液を捨て、PBSで細胞を1回洗浄する。

2、追加消化液は約1 mlを培養瓶に入れ、逆さま顕微鏡下で観察し、細胞が収縮して丸くなったら培養液を加えて消化を中止し、細胞を軽く吹きつけて脱落させ、その後懸濁液を15 ml遠心管に移し、1000 rpm遠心5 min ;

3、適量の凍結貯留液を用いて細胞を再懸濁し、凍結貯留管に放置する。

4、まず細胞凍結保存管を−20℃で1.5 h、次いで−80℃に移した