ヒト子宮内膜上皮細胞

人子宮内膜上皮は子宮組織から分離し、子宮は胎児を育てる器官で、骨盤の中部、膀胱と直腸の間に位置し、その位置は膀胱と直腸の充満度や体位によって変化することができる。子宮の正常な位置は主に子宮諸靭帯、骨盤横隔膜、尿生殖横隔膜及び会陰中心腱などの構造によって維持され、これらの構造が損傷したり弛緩したりした場合、子宮脱垂を引き起こすことができる。子宮内膜すなわち粘膜は、上皮（単層柱状上皮に属し、分泌細胞と繊毛細胞の2種類がある）と固有膜（結合組織から構成され、その内に大量の星形細胞があり、基質細胞と呼ばれる）からなり、子宮内膜は浅表の機能膜と深部の基底層に分けられ、機能層は厚く、内膜の厚さの約4/5；下地層は薄くて緻密で、約1/5を占めており、機能層は取り外し可能であるが、下地層は取り外し不可である。子宮内膜上皮細胞の主な機能：①子宮内膜は子宮粘膜とも呼ばれ、哺乳類子宮内壁を構成する層を指す、②子宮内膜は動情素とプロゲステロンの両方に反応するため、性周期（発情周期、月経周期）に従って顕著な変化が発生することができる。子宮内膜は胚移植と密接に関連しており、生殖生理の研究において重要な地位を占めている。胚と母体の「対話」の過程で、子宮内膜上皮細胞は極めて重要な役割を果たした。子宮内膜は雌性哺乳動物の子宮壁の最内層を構成し、子宮腔面に位置し、動物の生殖生理活動において重要な地位を占めている。子宮と子宮内膜はメス動物の生理機能と出産能力を維持する重要な器官であり、子宮内膜の再生修復は子宮の重要な生理機能である。体外培養子宮内膜上皮細胞はその生理機能、薬物作用及び各種病原因子作用下の病理生理変化の研究に重要な意義がある。
メソッドの概要：

会社の実験室で分離したヒト子宮内膜上皮はコラーゲン消化法を採用し、上皮細胞専用培地培養スクリーニングと結合して製造され、細胞総量は約5×10?cells/瓶。
品質検査：

会社の実験室で分離されたヒト子宮内膜上皮経Cytokeratin-19免疫蛍光鑑定では、純度は90%以上に達することができ、HIV-1、HBV、HCV、マイコプラズマ、細菌、酵母、真菌などを含まない。

当社のすべての製品は科学実験のみで、他の科学実験以外の使用はしません！

パッケージ被条件 ラットコラーゲンⅠ（2-5μg/cm2）

培地 含むFBS、成長添加剤、ペニシリン、Streptomycin等

液交換周波数 毎2-3日に1回液交換

せいちょうとくせい 壁を張る

細胞形態 上皮細胞様

世代プロパティ 伝達可能2～3世代

しょうかえき 0.25%yiプロテアーゼ

培養条件 気相：空気、95%；CO2の5％

準備作業

1.実験器材の準備：無菌の培養皿、培養瓶、ピペット、遠心管、手術器械などを準備し、高圧滅菌またはその他の適切な消毒処理を行う。

2.試薬の準備：適切な培地、消化酵素（例えば、コラーゲンなど）、ウシ胎児血清、双抗などの試薬を調製または購入し、無菌で有効期間内であることを確保する。

3.実験動物または組織由来の準備：実験ニーズに応じて、適切な動物を選択し、相応の麻酔または処刑を行い、必要な組織を獲得する、または既存の組織サンプルライブラリから組織を取得します。

取材と処理

1.取材：無菌条件下で、迅速に目標組織を取り出し、できるだけ組織への損傷を減らし、そして余分な脂肪、結合組織などの非目的組織を除去する。

2.洗浄：取り出した組織を予冷無菌PBSで数回洗浄し、血液と不純物を除去した。

3.切り取り：組織を約1-2 mm³の小さな塊に切り取り、その後消化する。

細胞分離

1.消化：切った組織塊を適量の消化酵素を含む遠心管に入れ、37℃の恒温ロッカまたは培養箱で一定時間消化する。その間に遠心管を軽く揺らして消化を均一にすることができます。

2.消化停止：組織塊の大部分が単細胞懸濁液または小細胞塊に消化された場合、血清含有培地を添加して消化を停止する。

3.濾過と遠心分離：細胞篩で細胞懸濁液を濾過し、未消化組織破片を除去し、その後濾液を適切な回転速度で遠心分離し、細胞沈殿を収集する。

細胞観察と検出

1.日常観察：毎日倒置顕微鏡で細胞の形態、成長状態、密度などを観察し、細胞の変化状況を記録し、例えば細胞汚染や異常を発見し、直ちに相応の措置をとる。
2.細胞計数と活力検査：必要な場合、台望藍染色などの方法を用いて細胞を計数と活力検査を行い、細胞の成長状況と健康状態を知ることができる。

一、取材と分離

1.迅速な操作

−室温または非栄養環境への長時間曝露を回避するために、組織の取材後すぐに処理する必要がある。

−無菌PBSまたは生理食塩水を用いて組織を洗浄し、血液、不純物を除去する。

2.消化酵素の選択

−組織タイプに応じて消化酵素を選択し、過剰消化による細胞損傷を回避する。

−消化時間は、細胞解離状態を顕微鏡により観察することができる厳格な制御（通常10〜30分）が必要である。

二、培養条件の最適化

1.培地の選択

・血清または特定の成長因子を含む培地（DMEM、RPMI 1640など）を使用して、一部の細胞にインスリン、EGFなどを添加する必要がある。

・培地ブランドまたはバッチの頻繁な交換を回避し、細胞適応圧力を減少させる。

2.壁貼りと継代

・初代細胞の壁貼り能力が弱く、シャーレ（コラーゲン、ポリウレタンなど）を包含する必要がある場合がある。

・継代時密度は70〜80%に制御することが推奨され、過度の合流は接触抑制と分化をもたらす。

三、汚染制御

1.無菌操作

-全過程を超浄台で操作し、交差汚染を回避するために使い捨て消耗品を使用する。

−培地に二重抗を添加することができるが、長期使用は細胞活性に影響を与える可能性がある。

2.マイコプラズマ検出

・定期的にマイコプラズマ汚染（例えばPCR法）を検査し、汚染後直ちに細胞を廃棄する必要がある。

四、状態監視

1.日常観察

・細胞形態、密度及び培地の色を毎日検査し、培地を適時に交換する（通常2〜3日ごとに液交換する）。

-細胞が丸くなり、破片が増えるなどの異常な形態は、汚染や栄養不足を示唆する可能性がある。

2.継代と凍結保存

・初代細胞分裂回数は限られており（一般的に5〜10代）、早期代次細胞を速やかに凍結保存する必要がある。

-凍結保存液はDMSO+血清（または専用凍結保存培地）を使用し、勾配が低下した後に液体窒素を保存することを提案する。