ヒト前立腺線維芽細胞

ヒト前立腺線維形成は前立腺組織から分離し、前立腺（Prostate）は雄の性腺器官、前立腺は対にならない実質的な性器宮であり、腺組織と筋組織から構成されている。前立腺は栗のように、底は上を向いて、膀胱と貼り合わせて、尖って下を向いて、泌尿器生殖隔膜に到着して、前は恥骨を貼って連合して、後ろは直腸に依存します。前立腺腺体の中間に尿道が通っており、尿道の上口を押さえているため、前立腺に問題がある場合、排尿はまず影響を受ける。前立腺は機体が非常に少なく、内、外の二重分泌機能を持つ性分泌腺である。外分泌腺として、前立腺は毎日前立腺液を分泌し、精液を構成する主要成分である、内分泌腺として前立腺から分泌されるホルモンを「プロスタグランジン」と呼ぶ。線維芽細胞（Fibroblast）は、胚胎時期の間葉芽細胞から分化した疎結合組織の主要細胞成分である。線維芽細胞は大きく、輪郭がはっきりしており、突起の紡錘形や星形の扁平状構造が多く、その細胞核は規則的な卵円形を呈し、核仁は大きくて明らかである。線維芽細胞は機能活動が旺盛で、細胞質は弱アルカリ性を好み、明らかな蛋白質合成と分泌活動を備え、一定の条件下で、それは線維細胞との相互転化を実現することができる、線維芽細胞は異なる程度の細胞変性、壊死、組織欠損の修復に非常に重要な役割を果たしている。分離したばかりの前立腺線維芽細胞は円形で屈折性が良く、培地中に懸濁している。30 min細胞は壁に貼り、その中の部分は偽足を伸ばし始め、小さな突起として現れた、6 h後の細胞は基本的に壁wanを貼り、紡錘形に伸び、細胞核ははっきりしており、分布は比較的に均一で、散在して成長し、凝集せずに塊になる;細胞の成長は迅速で、5-7日で融合状態を呈し、細胞の配列は緊密で、あるものは交差して重なり合って成長し、平坦で、細胞体は大きく、細胞質は透明で、細胞核は大きく、楕円形で、色は薄い。細胞が融合し、互いに網目状に結合する、細胞は突起の紡錘形または星形の扁平分布を呈している。
メソッドの概要：

会社の実験室で分離したヒト前立腺線維形成用yiプロテアーゼ−コラーゲン混合消化法は差速壁貼り法と結合して製造され、細胞総量は約5×10？cells/瓶。
品質検査：

会社の実験室で分離されたヒト前立腺線維形成経Vimentin免疫蛍光鑑定により、純度は90%以上に達することができ、しかもHIV-1、HBV、HCV、マイコプラズマ、細菌、酵母と真菌などを含まない。

当社のすべての製品は科学実験のみで、他の科学実験以外の使用はしません！

培地 含むFBS、成長添加剤、ペニシリン、Streptomycin等

液交換周波数 毎2-3日に1回液交換

せいちょうとくせい 壁を張る

細胞形態 線維芽細胞様

世代プロパティ 伝達可能5世代程度3世代以内の状態

しょうかえき 0.25%yiプロテアーゼ

培養条件 気相：空気、95%；CO2の5％

準備作業

1.実験器材の準備：無菌の培養皿、培養瓶、ピペット、遠心管、手術器械などを準備し、高圧滅菌またはその他の適切な消毒処理を行う。

2.試薬の準備：適切な培地、消化酵素（例えば、コラーゲンなど）、ウシ胎児血清、双抗などの試薬を調製または購入し、無菌で有効期間内であることを確保する。

3.実験動物または組織由来の準備：実験ニーズに応じて、適切な動物を選択し、相応の麻酔または処刑を行い、必要な組織を獲得する、または既存の組織サンプルライブラリから組織を取得します。

取材と処理

1.取材：無菌条件下で、迅速に目標組織を取り出し、できるだけ組織への損傷を減らし、そして余分な脂肪、結合組織などの非目的組織を除去する。

2.洗浄：取り出した組織を予冷無菌PBSで数回洗浄し、血液と不純物を除去した。

3.切り取り：組織を約1-2 mm³の小さな塊に切り取り、その後消化する。

細胞分離

1.消化：切った組織塊を適量の消化酵素を含む遠心管に入れ、37℃の恒温ロッカまたは培養箱で一定時間消化する。その間に遠心管を軽く揺らして消化を均一にすることができます。

2.消化停止：組織塊の大部分が単細胞懸濁液または小細胞塊に消化された場合、血清含有培地を添加して消化を停止する。

3.濾過と遠心分離：細胞篩で細胞懸濁液を濾過し、未消化組織破片を除去し、その後濾液を適切な回転速度で遠心分離し、細胞沈殿を収集する。

細胞観察と検出

1.日常観察：毎日倒置顕微鏡で細胞の形態、成長状態、密度などを観察し、細胞の変化状況を記録し、例えば細胞汚染や異常を発見し、直ちに相応の措置をとる。
2.細胞計数と活力検査：必要な場合、台望藍染色などの方法を用いて細胞を計数と活力検査を行い、細胞の成長状況と健康状態を知ることができる。

一、取材と分離

1.迅速な操作

−室温または非栄養環境への長時間曝露を回避するために、組織の取材後すぐに処理する必要がある。

−無菌PBSまたは生理食塩水を用いて組織を洗浄し、血液、不純物を除去する。

2.消化酵素の選択

−組織タイプに応じて消化酵素を選択し、過剰消化による細胞損傷を回避する。

−消化時間は、細胞解離状態を顕微鏡により観察することができる厳格な制御（通常10〜30分）が必要である。

二、培養条件の最適化

1.培地の選択

・血清または特定の成長因子を含む培地（DMEM、RPMI 1640など）を使用して、一部の細胞にインスリン、EGFなどを添加する必要がある。

・培地ブランドまたはバッチの頻繁な交換を回避し、細胞適応圧力を減少させる。

2.壁貼りと継代

・初代細胞の壁貼り能力が弱く、シャーレ（コラーゲン、ポリウレタンなど）を包含する必要がある場合がある。

・継代時密度は70〜80%に制御することが推奨され、過度の合流は接触抑制と分化をもたらす。

三、汚染制御

1.無菌操作

-全過程を超浄台で操作し、交差汚染を回避するために使い捨て消耗品を使用する。

−培地に二重抗を添加することができるが、長期使用は細胞活性に影響を与える可能性がある。

2.マイコプラズマ検出

・定期的にマイコプラズマ汚染（例えばPCR法）を検査し、汚染後直ちに細胞を廃棄する必要がある。

四、状態監視

1.日常観察

・細胞形態、密度及び培地の色を毎日検査し、培地を適時に交換する（通常2〜3日ごとに液交換する）。

-細胞が丸くなり、破片が増えるなどの異常な形態は、汚染や栄養不足を示唆する可能性がある。

2.継代と凍結保存

・初代細胞分裂回数は限られており（一般的に5〜10代）、早期代次細胞を速やかに凍結保存する必要がある。

-凍結保存液はDMSO+血清（または専用凍結保存培地）を使用し、勾配が低下した後に液体窒素を保存することを提案する。