ラット初代細胞

ラット初代細胞継代方法：

一、壁貼り細胞の消化法継代

1、瓶内の古い培養液を吸引したり捨てたりする。

2、1 ml程度の消化液（EDTA混合液）を加えて培養瓶を軽く揺動し、瓶底細胞を溶液に浸漬させた。

3、2-5分間消化した後、培養瓶を顕微鏡下に置いて観察したところ、元壁の細胞は次第に円形に傾き、まだ漂っていない時、消化液を捨て、培養液を加えて消化を停止した。

4、壁に貼り付けた細胞をストローで懸濁液に吹き付け、それぞれ他の2〜3つの培養瓶に接種し、37℃培養箱に入れて培養を続けた。翌日、壁貼りの成長状況を観察した。

二、懸濁細胞の継代

1、直接継代

1）懸濁細胞を瓶の底にゆっくり沈殿させた後、上清を1/2-2/3吸引した。

2）細胞懸濁液をストローで吹き付けた後、他の2〜3つのフラスコにそれぞれ接種し、37℃の培養箱で培養した。

2、遠心法の継代

1）細胞を培養液とともに遠心管内に移し、800〜1000 rpm、5分間遠心した。

2）上清を除去し、新しい培養液を加えてチューブ内を遠心分離し、ストローで吹きつけて細胞懸濁液を形成させる。

3）細胞懸濁液を他の2〜3つのフラスコにそれぞれ接種し、37℃の培養箱で培養した。

ラット初代細胞培養における5つのよくあるエラー

エラー1：小管初代細胞を水浴中でしばらく解凍する

是正1：初代細胞は解凍過程に非常に敏感であるため、小瓶を37℃の水浴中に置き、内容物が解凍したばかりになるまで保持し、軽く回転することが重要である。その後、直ちに水浴から小瓶を取り出し、無菌操作台に移すべきである。培養瓶が解凍する前に準備ができていることを確認して、直ちに細胞を接種し、培養箱に置くことができるようにしてください。

エラー2：小瓶を解凍した後、直接遠心初代細胞

訂正2：遠心手順は少量のDMSO残留よりも有害であるため、解凍後の遠心細胞を推奨しない。初代細胞を回復した翌日に培地を交換して、残留DMSOを除去することを覚えておいてください。

エラー3：初代細胞が融合しすぎてしまうことを可能にする

訂正3：100合流まで成長すると、初代細胞は老化することができる。記憶しておくと、初代細胞は100純ではないので、汚染細胞の成長をできるだけ減らすことが重要です。細胞が90〜95%融合に達したときに、初代細胞を継代培養することを提案した。

エラー4：初代細胞は容易に再凍結保存することができる

是正4：通常、細胞の老化を促進したり、機能変化をもたらしたりすることができるので、プロト細胞の再凍結保存は推奨されていません。初代細胞は非常に敏感で、再凍結は細胞の死や損傷を引き起こす可能性がある。

エラー5：初代細胞は無限に増殖することができる

訂正5：細胞系と異なり、初代細胞は限られた増幅能力を持っている。遺伝的ドリフトを防ぐために、一日も早く初代細胞を用いた実験を行うことを提案した。また、増殖が困難な細胞タイプを使用している場合は、少量の混在細胞（繊維芽細胞など）が時間とともに大量に成長して主要な細胞になる可能性があるため、細胞形態を密接に監視する必要があります。