ヒト高温需要因子A 1（HTRA 1）組換えタンパク質

ヒト高温需要因子A 1（HTRA 1）組換えタンパク質

製品名称：高温需要因子A 1（HTRA 1）組換えタンパク質

英語名：再組み合わせ高温要因A1（HTRA1）

HtrA;L56;ORF480;PRSS11;HtrAセリンペプチダーゼ1;プロテアーゼ、セリン、11;IGFBP5 プロテアーゼ;高温要求 セリンペプチダーゼ 1

モデル：CS-D003型

酵素とキナーゼ

種：Homo sapiens（ヒューマン、ヒト）

出所：原核表現

宿主E.コリ

エンドトキシンレベル：<1.0 EU/μg（LAL法測定）

亜細胞定位：：分泌、細胞質

予測分子量：47.2kDa

実際の分子量：47 kDa（差異解析は説明書参照）

クリップとラベル:Gly204~Leu364のN端末の彼およびGSTタグ

緩衝液成分：20 mM Tris、150 mM NaCl緩衝液（pH 8.0、1 mM EDTA、1 mM DTT、0.01%SKL、5%Trehalose、Proclin 300を含む）

性状：凍結乾燥粉末

純度：> 90%

等電点：6.6

適用：肯定的な制御;免疫原;SDS-ページ;WB。

仕様：10μg50μg200μg1mg5mg

1、組織蛋白抽出

1）必要な器材：製氷機、マーキングペン、1.5 ml EPチューブ2セット（高温高圧処理）、大きなアイスボックス1つ、1.5 ml EPチューブボックス1つ、手袋、眼科切削（高温高圧処理）、新鮮な組織または−80℃の冷蔵庫組織に保存、4℃の冷蔵庫に保存されたPBS（高温度高圧処理）、移液銃、吸頭（高温高圧処理）、研磨棒2セット（高温高圧処理）、掌上遠心機、ろ紙、三除染分解液、ベンゼンメチルスルホン酸フッ素（PMSF、プロテアーゼ阻害剤、猛毒）、遠心機、ビーカー、2×SDSゲル上試料緩衝液、ジスルフィソ糖アルコール（DTT）、発振器、発泡板。

a.製氷機による製氷、

b.マーカーペンは2セットのEPチューブをマーカーする、

c.大氷箱、EP管箱を氷に入れ、1セットのマーカーペンがマーカーを作ったEP管を大氷箱に入れ、もう1セットのマーカーペンがマーカーを作ったEP管をEP管箱に入れ、手袋をし、EP管箱、眼科せん断大豆サイズ（約100 mg）の新鮮な組織を持って、または-80℃の冷蔵庫組織に保存する。

d.4℃の冷蔵庫に保存したPBSを取り出し、EP管に1 mlのPBSを滴下し、眼科切削組織（動作が速い）、掌上遠心、上清を捨て、さらにEP管に1 mlのPBSを滴下し、研磨棒を研磨し、3000回転で10分間遠心分離し、上清を捨て、濾紙はできるだけ管口の残留液体を吸引し、EP管中の沈殿物の体積を推定し、以上のステップはできるだけ氷上で操作する。

e.4℃冷蔵庫から三汚物分解液を取り出し、−20℃冷蔵庫からPMSFを取り出して大氷箱に入れ、EP管に沈殿物の3−5倍体積の三汚物分解液（一般的には5倍）を滴下し、PMSF（両者の割合は94：6）を加え、研磨棒を研磨（氷の上で20−30分十分に分解）し、以上のステップはすべて行う必要がある。

f.遠心機を予冷し、十分に分解した組織液を4℃、10000を10分間遠心分離する、

g.ビーカーを水道水で洗浄し、単蒸水を入れ、電気炉で煮沸する、

h.2×SDSゲル添加緩衝液（常温に保管）を用意し、−20℃の冷蔵庫に保存したDTTを取り出し、大氷箱に入れ、遠心分離した上清液をピペットで別のEPチューブセットに定量的に吸引し（下層沈殿物を吸引しない）、上清液：2×SDS：DTT＝1：0.8：0.2を押して2×SDS及びDTTを加え、手のひらで遠心分離し、それからEPチューブを発泡板に挿入し、煮沸したビーカーに投入して6−8分間煮る（電気炉の電力をあまり大きくしないで、キャップが破裂しないように）、

i.発泡板をピンセットで取り出し、大きな氷箱に入れて10分間冷却し、掌上遠心分離し、さらに-20℃の冷蔵庫に入れて保存する。

注意：溶解液は適宜に単洗浄溶解液や細胞溶解液などを選択することもできる。

2、壁貼り細胞タンパク質抽出（細胞タンパク質含量は一般的に約1 x 10-9 mg/細胞）

1）必要な器材：製氷機、細胞ドクターブレード、マーカーペン、2セットの1.5 ml EP管（高温高圧処理）、2つの大きな氷箱、手袋、細胞が成長した培養瓶、4℃冷蔵庫に保存されたPBS、三除染分解液、ベンジルスルホン酸フッ素（PMSF、プロテアーゼ抑制剤、猛毒）、移液銃、吸頭（高温高圧処理）、ろ紙、遠心分離機、ビーカー、4×SDSゲル上様緩衝液、ジスルフィトール（DTT）、発泡板。