ESターゲット技術サービス

一、ESターゲット技術サービス技術定義と核心原理

ES射的技術胚性幹細胞（Embryonic Stem Cells，ES）の相同組換えに基づく遺伝子編集方法であり、外因性DNAの定点をゲノム特定位置に統合することにより、遺伝子ノックアウト（KO）、条件ノックアウト（CKO）、遺伝子ノックアウト（KI）及び点突然変異（PM）などの精密修飾を実現する。その核心原理は以下のとおりである：

1. 相同再結合機構：

• 設計内容どうしつアーム（標的遺伝子と相同）のベクターを用いて、異種配列（例えばスクリーニングマーカー遺伝子）を標的部位に挿入する。

2. プラスマイナスフィルタシステム：

• フィルタマーク（Neoᵣなど）：相同領域を挿入し、組み換えに成功したES細胞をスクリーニングする。

• ネガティブフィルタマーク（例えばHSV-tk/DTA）：相同腕の外側に位置し、ランダムに挿入された細胞を淘汰する。

3. 胚性幹細胞全能性：

• 修飾後のES細胞は嚢胞胚に注入され、キメラマウス（F 0）に発育し、生殖系伝達により安定した遺伝モデルを得た。

技術的な位置づけ：ESターゲットはCRISPR前時代の金基準であり、特に使用に適している大きなクリップ編集（>10 kb）と複雑な遺伝子修飾（条件付きノックアウトなど）。

二、ESターゲット技術サービス標準化された運用プロセスと技術革新

（一）伝統的なES射的プロセス（7〜12ヶ月）

クリティカルステップ解析：

1. キャリア構築：

• 相同アームの長さは通常3〜5 kbであり、大セグメント挿入にはBACキャリアが必要である。

2. ES細胞系選択：

• 一般用品系：129S 6/SvEvTac（高再結合効率）、C 57 BL/6 N（背景清浄）。

3. かん合体制準備：

• 嚢胞胚注射後の嵌合率は約20〜70%であり、白色化宿主などの毛色標識により視覚的にスクリーニングする必要がある。

（二）技術革新：EPS細胞標的化

EPS細胞（Extended Pluripotent Stem Cells）は、我が国の科学者によって2017年にshou次で報告され、その利点は以下の通りである：

1. 効率の向上：

• 従来のES細胞の10～100倍。

2. サイクル短縮：

• キメラを1ステップで取得し、3ヶ月間の系統伝達を省略する。

3. 総合性の向上：

• 単細胞は嚢胞胚に注入すると99.99%のキメラを生成することができる。