TALENs動物モデル

交渉可能更新03/04

モデル

製造者の性質: プロデューサー

製品カテゴリー

原産地

オンラインコンサルト

概要

TALENs動物モデル構築は、TALENs遺伝子編集技術を用いて構築された実験動物モデルである。TALENsは転写活性化因子様効果物（TALE）のDNA結合ドメインとヌクレアーゼ（FokI）の切断ドメインを融合することにより、目的のDNA配列を特異的に識別し切断することができ、それによってゲノムの正確な編集を実現する。

製品詳細

TALENs動物モデル

一、TALENs技術原理と核心突破

（一）構造設計と作用機構

TALENs（Transcription Activator-Like Effector Nucleases）とは人工工学化ヌクレアーゼ、2つの部分から構成されています。

DNA識別ドメイン（TALEタンパク質）：

由34アミノ酸の繰り返し単位構成され、各ユニットは12位、13位の可変アミノ酸（RVDS）特異的に識別される単一塩基：

RVDタイプ	しきべつえんき	けつごうきょうど
NI	A	高特異性
NG	T	高特異性
HD	C	高特異性
NN	G/A	クロス識別

識別シーケンス長は通常15〜20 bpを使用して、ターゲットwei一性を確保します。

DNA切断ドメイン（FokIヌクレアーゼ）：

形成する必要があるダイマーDNAを切断するためには、TALENsは両腕の間にある切断部位（通常12〜20 bpの間隔領域）をペアで設計する必要があります（左右腕）。

（二）遺伝子編集機構

二本鎖破断（DSB）：

TALE結合標的配列→FokI二量化→DNA二重鎖切断。

パスの修復：

非相同末端接続（NHEJ）：ランダム挿入/欠落（Indels）、遺伝子ノックアウトを引き起こす。
相同方向性修復（HDR）：外因性修復テンプレートを提供し、正確な挿入または点突然変異を実現する必要がある。

技術的ブレークスルー：shu次実装任意のゲノム部位の正確な切断を行い、かつ初期のZFN技術よりも脱ターゲット率が低かった。

二、TALENs動物モデル構築プロセス

（一）標準化操作手順

（二）重要技術の最適化

手順	コアオペレーション	革新的なシナリオ
ターゲットせっけい	繰り返し配列/メチル化領域を避け、間隔領域を14 ~ 18 bpに最適化	ソフトウェア予測（TALEN Targeter）による成功率の向上
モジュール組立	Golden Gateクローニング法：

6モジュール直列（＋63アーキテクチャ）
酵素カット結合（BsaI/BSMBI）/6日以内に構築を完了し、効率を5倍に向上｜
|発現ベクター｜哺乳動物の二重プロモーターベクター（CMV/T 7）、細胞トランスフェクションとmRNA合成を支持する｜多種応用（ゼブラフィッシュ、マウス、ヒトiPS細胞）に適合する｜
|アクティブ検証｜酵母単ハイブリダイゼーション系または細胞報告遺伝子検査｜代替に時間がかかるES細胞を標的にし、周期を1週間に短縮｜
|胚送達｜受精卵顕微鏡注射：
mRNA：TALENs invitro転写産物
RNP複合体：TALE-FokIタンパク質複合体｜RNPは脱標的効果を減少させ、安全性を向上させる

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