ZFNs動物モデル

交渉可能更新03/04

モデル

製造者の性質: プロデューサー

製品カテゴリー

原産地

オンラインコンサルト

概要

ZFNs動物モデル：亜鉛フィンガーゼ（ZFNs）動物モデルは亜鉛フィンガーゼ遺伝子編集技術を用いて構築された実験動物モデルである。亜鉛フィンガー核酸酵素は亜鉛フィンガータンパク質（ZFP）と核酸酵素（FokI）が融合したもので、亜鉛フィンガータンパク質は目標DNA配列に特異的に結合することができ、核酸酵素はDNAを切断することを担当し、それによって特定の遺伝子部位に二本鎖断裂を導入し、細胞の修復メカニズムを誘導し、遺伝子ノックアウト、ノックアウト、突然変異を実現する。

製品詳細

一、ZFNs動物モデル技術原理と核心メカニズム

ZFNs Yes第1世代プログラマブル遺伝子編集ツール、融合によるDNA結合ドメイン（ジンクフィンガープロテイン）とDNA切断領域（FokIヌクレアーゼ）標的編集を実現する：

ジンクフィンガータンパク質ドメイン：

由30〜34アミノ酸繰り返し単位構成され、各ユニットは第12、13位可変残基（RVDs）特定の塩基を識別するには：

RVDタイプ	しきべつえんき	特異性
NI	A	高い
NG	T	高い
HD	C	高い
NN	G/A	中程度

単一亜鉛指認識3 bp、直列3～6個のターゲット可能9〜18 bpシーケンス。

FokI切断領域：

要二量化切断機能を有効にすることができます→ZFNsはペア設計（左腕/右腕）を必要とし、切断部位は両腕の結合部位の間（間隔領域5-7 bp）にあります。

メカニズムの編集：

二本鎖断裂（DSB）→細胞起動修復経路：

非相同末端接続（NHEJ）：ランダム挿入/欠落（Indels）、遺伝子ノックアウトを引き起こす。
相同方向性修復（HDR）：外因性修復テンプレート（ssODNなど）が必要で、点突然変異や遺伝子挿入を実現する。

技術的ブレークスルー：shou次実現哺乳類ゲノム標的編集（2005年）、正確な遺伝子編集時代を開く。

二、ZFNs動物モデルプロセスとテクノロジーの最適化

（一）標準化操作手順

（二）重要技術パラメータの最適化

手順	コアオペレーション	革新的な最適化
ターゲットせっけい	高繰り返し/メチル化領域を避け、間隔領域5-7 bp	ソフトウェア予測（ZiFiT）による結合効率の向上
亜鉛フィンガー組立	モジュラ直列法：

3-6個の亜鉛フィンガーユニット直列接続
Golden Gateクローニング（BsaI/BSMBI）/6日間で構築完了、成功率>80%｜
|発現ベクター｜二重プロモーター担体（CMV/T 7）、mRNA合成と蛋白発現を支持する｜多種（ゼブラフィッシュ、マウス、ブタ）に適合する｜
|配信方法｜−受精卵顕微鏡注射ZFNs mRNA
体細胞トランスフェクション+核移植（大型動物）｜mRNA送達減少脱標的｜
|修復の強化｜連合ssODNテンプレート＋NHEJ阻害剤（SCR 7）｜HDR効率が3倍に向上｜

三、多種応用事例とモデル優勢

（一）典型的な種と疾病モデル

種	ターゲット遺伝子	疾患モデル	効率/表現型	研究価値
ゼブラフィッシュ	ゴールデン	白化病	95%F 0世代色素欠損	発育遺伝子機能スクリーニング
ネズミ匹	ラグ2/IL2rg	免疫不全モデル	ダブルノックアウト、ヒト化移植プラットフォーム	腫瘍のyiフリー治療に関する研究
豚	GGTA1 の	異種器guan移植モデル	α−Gal抗原をノックアウトし、超急性拒絶反応を低下させる	ヒト化器官の開発
ショウジョウバエ	黄色	たいしょくとつぜんへんい	生殖系突然変異率5.7%（動物モデル）	遺伝子機能の保存性検証

（二）かけがえのないアプリケーションシーン

高GCエリア編集：

PAMシーケンスの制限がなく、CRISPR/Cas 9で編集できない領域をターゲットにすることができます。

低射出率要件：

治療的編集における脱標的率は<0.1%（CRISPRは1〜10%）であった。

大型動物モデル：

豚、牛などの種ではCRISPRより免疫原性が低い。

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